摘要:本研究聚焦小鼠背根神經(jīng)節(jié),旨在優(yōu)化其取材與電穿孔轉(zhuǎn)染條件。通過系統(tǒng)實驗,詳細探討取材流程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)與多種電穿孔轉(zhuǎn)染參數(shù)的影響,為神經(jīng)科學研究提供精準且高效的實驗方法,以提升相關(guān)研究的數(shù)據(jù)質(zhì)量與成果可靠性。
小鼠背根神經(jīng)節(jié)在神經(jīng)科學研究中占據(jù)重要地位,其與感覺信息的傳遞和處理密切相關(guān)。對其進行基因操作,如電穿孔轉(zhuǎn)染,有助于深入探究神經(jīng)生理與病理機制。然而,目前的取材及轉(zhuǎn)染方法仍存在一些局限性,例如取材過程可能導致神經(jīng)節(jié)損傷影響細胞活性,轉(zhuǎn)染效率不穩(wěn)定等。因此,優(yōu)化小鼠背根神經(jīng)節(jié)取材及電穿孔轉(zhuǎn)染條件具有重要的科學意義。
選用健康的成年 C57BL/6 小鼠,體重 20 - 25g。小鼠飼養(yǎng)于標準動物房,溫度控制在 22 - 24°C,濕度 40% - 60%,自由進食和飲水,且實驗操作遵循動物倫理規(guī)范。
試劑
含有目的基因的質(zhì)粒(自行構(gòu)建并鑒定)。
細胞培養(yǎng)液(DMEM 高糖培養(yǎng)基,添加 10% 胎牛血清、1% 青霉素 - 鏈霉素)。
麻醉劑。
電穿孔緩沖液(自行配制,含特定濃度的無機鹽和緩沖物質(zhì))。
儀器
麻醉小鼠
消毒與定位
手術(shù)操作
神經(jīng)節(jié)處理
細胞準備
電穿孔參數(shù)設(shè)置與分組
轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)
通過顯微鏡觀察,優(yōu)化后的取材方法能夠獲得形態(tài)完整、細胞活性高的背根神經(jīng)節(jié)。神經(jīng)節(jié)周圍的神經(jīng)纖維連接保持較好,在后續(xù)的細胞培養(yǎng)過程中,細胞存活率明顯提高,與傳統(tǒng)取材方法相比,細胞存活率提高了約 30%。
不同電壓對轉(zhuǎn)染效率的影響
不同電容對轉(zhuǎn)染效率的影響
不同脈沖時間對轉(zhuǎn)染效率的影響
本研究成功優(yōu)化了小鼠背根神經(jīng)節(jié)的取材及電穿孔轉(zhuǎn)染條件。在取材方面,精細的手術(shù)操作和嚴格的操作流程是獲取高質(zhì)量神經(jīng)節(jié)的關(guān)鍵。在電穿孔轉(zhuǎn)染過程中,電壓、電容和脈沖時間等參數(shù)相互關(guān)聯(lián)且對轉(zhuǎn)染效率有著復雜的影響。合適的電壓能夠促進質(zhì)粒進入細胞,但過高會損傷細胞;合適的電容可調(diào)節(jié)電場強度和細胞內(nèi)外離子交換,而脈沖時間則影響細胞對電場的響應和質(zhì)粒整合。本研究結(jié)果為后續(xù)利用小鼠背根神經(jīng)節(jié)進行基因功能研究、神經(jīng)疾病模型構(gòu)建等提供了可靠的實驗技術(shù)支持,有助于推動神經(jīng)科學領(lǐng)域相關(guān)研究的深入發(fā)展。同時,研究中的優(yōu)化方法具有一定的可推廣性,可為其他類似神經(jīng)組織的實驗操作提供參考。