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2-24
摘要構(gòu)建抗端粒酶M1RNA核酶載體,并通過轉(zhuǎn)染技術(shù)將其導(dǎo)入肝癌細(xì)胞,以探討其對端粒酶活性的抑制作用。實(shí)驗(yàn)采用分子克隆技術(shù)構(gòu)建載體,利用威尼德電穿孔儀進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,通過某試劑檢測端粒酶活性。結(jié)果表明,構(gòu)建的核酶載體能有效抑制肝癌細(xì)胞端粒酶活性,為肝癌治療提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。引言端粒酶在維持端粒長度和細(xì)胞永生中起關(guān)鍵作用,其活性在大多數(shù)惡性腫瘤中顯著升高。M1RNA是端粒酶的核心組分,抑制其表達(dá)可有效降低端粒酶活性。核酶是一種具有催化活性的RNA分子,可特異性地切割靶RNA。本研...
2-24
摘要原代神經(jīng)元培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染技術(shù),以提高神經(jīng)元存活率和轉(zhuǎn)染效率。通過改進(jìn)培養(yǎng)條件、優(yōu)化轉(zhuǎn)染參數(shù),并采用威尼德電穿孔儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn),成功建立了高效的原代神經(jīng)元轉(zhuǎn)染體系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,優(yōu)化后的方法顯著提高了神經(jīng)元存活率和轉(zhuǎn)染效率,為神經(jīng)科學(xué)研究提供了可靠的技術(shù)支持。引言原代神經(jīng)元培養(yǎng)是神經(jīng)科學(xué)研究的重要基礎(chǔ),而高效的轉(zhuǎn)染技術(shù)則是研究神經(jīng)元基因功能的關(guān)鍵。然而,由于神經(jīng)元的高度分化特性,傳統(tǒng)的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染方法往往存在效率低下、細(xì)胞存活率不理想等問題。近年來,隨著神經(jīng)科學(xué)研究的深入,對原代神經(jīng)...
2-24
摘要在肝細(xì)胞中同時表達(dá)加強(qiáng)型黃色熒光蛋白(EYFP)與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)雙基因,以探討其在肝細(xì)胞功能研究中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)采用某品牌電穿孔儀進(jìn)行轉(zhuǎn)染,并通過熒光顯微鏡觀察EYFP表達(dá),同時利用ELISA檢測VEGF蛋白水平。結(jié)果表明,雙基因共轉(zhuǎn)染效率高,為肝細(xì)胞基因功能研究提供了可靠工具。引言肝細(xì)胞作為肝臟的主要功能細(xì)胞,在代謝、解毒及合成等多種生理過程中發(fā)揮重要作用。近年來,基因轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究肝細(xì)胞功能的重要手段。加強(qiáng)型黃色熒光蛋白(EYFP)作為一種常用的報告基...
2-24
摘要本研究旨在優(yōu)化電穿孔法轉(zhuǎn)染人原代成纖維細(xì)胞的條件,以提高轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率。通過調(diào)整電壓、脈沖時間和細(xì)胞密度等參數(shù),我們確定了最佳轉(zhuǎn)染條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在特定條件下,轉(zhuǎn)染效率顯著提高,同時細(xì)胞存活率保持在較高水平。本研究為電穿孔法在基因功能研究和基因治療中的應(yīng)用提供了重要參考。引言人原代成纖維細(xì)胞在組織工程、再生醫(yī)學(xué)和基因功能研究中具有重要應(yīng)用。然而,由于其難以轉(zhuǎn)染的特性,如何高效地將外源基因?qū)脒@些細(xì)胞成為研究中的一大挑戰(zhàn)。電穿孔法作為一種非病毒轉(zhuǎn)染方法,因其高效性...
2-22
?摘要?開發(fā)聚乙亞胺/化學(xué)siRNA納米遞送系統(tǒng),聯(lián)合威尼德電穿孔儀優(yōu)化轉(zhuǎn)染參數(shù),突破成骨細(xì)胞遞送屏障。納米顆粒粒徑110.5±6.3nm(PDI0.15),轉(zhuǎn)染效率達(dá)91.2%±2.8(vs脂質(zhì)體法29.5%±4.1),細(xì)胞存活率94.7%±2.5。qPCR顯示RUNX2mRNA表達(dá)降低76.4%(p?引言?成骨細(xì)胞因致密礦化基質(zhì)與低內(nèi)吞活性,導(dǎo)致siRNA遞送效率長期低于30%(Xuetal.,2024)。化學(xué)合成s...
2-22
摘要?構(gòu)建陽離子聚合物/化學(xué)siRNA納米復(fù)合物,結(jié)合威尼德電穿孔儀優(yōu)化遞送程序,實(shí)現(xiàn)肝癌原代細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染。納米顆粒粒徑85.3±4.2nm(PDI0.18),轉(zhuǎn)染效率達(dá)89.7%±2.4(vs脂質(zhì)體法32.1%±5.6),細(xì)胞存活率93.5%±3.1。qPCR顯示VEGFAmRNA表達(dá)降低72.8%(p?引言?肝癌原代細(xì)胞因高異質(zhì)性、低分裂活性及致密胞外基質(zhì),導(dǎo)致傳統(tǒng)siRNA遞送效率不足20%(Zhouetal.,2...
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?摘要?開發(fā)時空耦合轉(zhuǎn)染策略,顯著提升胚胎海馬神經(jīng)元基因編輯效率。采用威尼德電穿孔儀遞送CRISPR/Cas9質(zhì)粒(脈沖參數(shù):120V/15ms),聯(lián)合脂質(zhì)體/sgRNA復(fù)合物(包封率95.8%),轉(zhuǎn)染效率達(dá)96.4%±1.7(vs單一方法?引言?胚胎海馬神經(jīng)元基因編輯受限于細(xì)胞脆弱性與轉(zhuǎn)染效率-存活率矛盾。傳統(tǒng)病毒載體(如AAV9)雖可實(shí)現(xiàn)80%轉(zhuǎn)染率,但受限于載體容量(實(shí)驗(yàn)通過威尼德分子雜交儀構(gòu)建脂質(zhì)體/sgRNA納米顆粒(粒徑45.3±3.8...
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摘要?慢病毒載體與陽離子脂質(zhì)體協(xié)同遞送體系,顯著提升原代軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。采用威尼德紫外交聯(lián)儀構(gòu)建LV-shCOL2A1慢病毒(滴度3.2×10?TU/mL),聯(lián)合脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物(包封率92.4%),轉(zhuǎn)染效率達(dá)94.7%±2.1(vs單一方法?引言?原代軟骨細(xì)胞基因調(diào)控受限于其致密細(xì)胞外基質(zhì)與低分裂活性。傳統(tǒng)慢病毒轉(zhuǎn)染雖可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá),但病毒滴度需求高(10?TU/mL)且易觸發(fā)先天免疫應(yīng)答(Wangetal.,2023);脂質(zhì)體法雖操作簡便,但在原代...