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摘要?通過系統(tǒng)優(yōu)化威尼德電穿孔儀參數(shù)，建立原代軟骨細(xì)胞siRNA遞送新策略。采用梯度脈沖電壓（200-400V）聯(lián)合間歇式電場(chǎng)刺激，轉(zhuǎn)染效率提升至82.3%±3.1（vs傳統(tǒng)方法38.5%±5.2），細(xì)胞存活率維持89.6%±2.8。熒光示蹤與qPCR驗(yàn)證COL2A1基因沉默效率達(dá)76.8%，為軟骨退行性疾病治療提供高效遞送方案。?引言?軟骨細(xì)胞基因編輯技術(shù)長(zhǎng)期受限于細(xì)胞外基質(zhì)屏障與低轉(zhuǎn)染效率。傳統(tǒng)脂質(zhì)體法在原代軟骨細(xì)胞中僅實(shí)現(xiàn)本研究...

?摘要?優(yōu)化體內(nèi)電穿孔參數(shù)（電壓200V，脈寬50ms，脈沖間隔500ms），結(jié)合靶向免疫細(xì)胞的DNA疫苗設(shè)計(jì)（某試劑），在BALB/c小鼠模型中實(shí)現(xiàn)抗原表達(dá)效率提升至85.3±5.2%，并顯著增強(qiáng)特異性IgG抗體（4.1倍）和CD8+T細(xì)胞應(yīng)答（3.8倍）。研究為DNA疫苗的臨床轉(zhuǎn)化提供了高效遞送策略。?引言?DNA疫苗因其安全性及誘導(dǎo)全面免疫應(yīng)答的優(yōu)勢(shì)成為研究熱點(diǎn)，但體內(nèi)遞送效率低限制了其應(yīng)用。傳統(tǒng)肌肉注射法抗原表達(dá)不足，而電穿孔通過瞬時(shí)膜通透性增強(qiáng)可促進(jìn)D...

?摘要?懸浮細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)染效率低的問題，通過優(yōu)化電穿孔參數(shù)（電壓、脈沖寬度、脈沖數(shù)）、引入細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)劑（某試劑）及核定位信號(hào)（NLS）修飾質(zhì)粒，顯著提升JurkatT細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率至72.6±4.1%，同時(shí)維持細(xì)胞存活率90%。研究為基因治療及功能研究提供了高效、低損傷的轉(zhuǎn)染方案。?引言?懸浮細(xì)胞（如JurkatT細(xì)胞、K562細(xì)胞）因缺乏貼壁結(jié)構(gòu)，電穿孔轉(zhuǎn)染效率普遍低于貼壁細(xì)胞。傳統(tǒng)方法依賴高電壓脈沖，易導(dǎo)致細(xì)胞膜不可逆損傷及DNA斷裂。近年研究提出動(dòng)態(tài)...

?摘要?慢病毒載體介導(dǎo)的基因整合技術(shù)，成功構(gòu)建了基于雌激素響應(yīng)元件（ERE）的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株（ER-SC）。實(shí)驗(yàn)表明，ER-SC在17β-雌二醇（E2）刺激下熒光報(bào)告基因表達(dá)強(qiáng)度提升12.3倍，且穩(wěn)定性維持超過20代。機(jī)制分析揭示ERα通過協(xié)同H3K4me3修飾增強(qiáng)ERE啟動(dòng)子活性，為激素依賴性疾病的體外模型開發(fā)提供新工具。?引言?雌激素受體（ER）信號(hào)通路的異常激活與乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等疾病密切相關(guān)。傳統(tǒng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染模型存在重復(fù)性差、靈敏度低等問題，而穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株可通過基因組整合實(shí)現(xiàn)...

摘要溶膠-凝膠法結(jié)合靜電吸附策略制備了聚賴氨酸修飾的硅納米復(fù)合物（PLA-SiNPs），其粒徑為150±20nm，表面電荷+25.3mV，可高效負(fù)載質(zhì)粒DNA（包封率91.2±3.5%）。體外實(shí)驗(yàn)表明，PLA-SiNPs的轉(zhuǎn)染效率達(dá)78.4±5.1%，較未修飾硅納米顆粒提升2.8倍，且細(xì)胞毒性顯著降低（存活率95%），為基因遞送提供了新型高效載體。?引言?基因轉(zhuǎn)染效率是限制基因治療和功能研究的關(guān)鍵因素。傳統(tǒng)非病毒載體（如脂質(zhì)體、聚乙烯...

?摘要?陽(yáng)離子脂質(zhì)體/聚電解質(zhì)雙層轉(zhuǎn)染粒子（DTP），通過優(yōu)化表面電荷與粒徑顯著提升輪狀病毒（RV）基因組遞送效率。實(shí)驗(yàn)表明，DTP的感染性復(fù)活效率達(dá)82.3±4.1%，較傳統(tǒng)單層脂質(zhì)體提高2.3倍。機(jī)制分析表明，DTP通過增強(qiáng)細(xì)胞吸附、內(nèi)體逃逸及核酸保護(hù)實(shí)現(xiàn)高效病毒復(fù)活，為RV體外研究及疫苗開發(fā)提供新策略。?引言?輪狀病毒（Rotavirus,RV）是嬰幼兒病毒性胃腸炎的主要病原體，其體外感染性復(fù)活效率是疫苗研發(fā)和致病機(jī)制研究的關(guān)鍵瓶頸。傳統(tǒng)遞送系統(tǒng)（如單層脂...

摘要核酸分子雜交技術(shù)在病毒感染診斷中的應(yīng)用。通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，建立了基于核酸分子雜交技術(shù)的病毒檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有較高的靈敏度和特異性，能夠有效檢測(cè)多種病毒核酸。研究還探討了該技術(shù)在臨床樣本檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，為病毒感染診斷提供了新的技術(shù)手段。引言病毒感染是全球公共衛(wèi)生面臨的重大挑戰(zhàn)之一，快速、準(zhǔn)確的病毒檢測(cè)方法對(duì)于疾病診斷和防控至關(guān)重要。核酸分子雜交技術(shù)作為一種重要的分子生物學(xué)方法，在病毒檢測(cè)領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大潛力。該技術(shù)基于核酸堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，通過特異性探針與目...

摘要分子雜交技術(shù)，對(duì)17株不同毒力的鉤端螺旋體基因組DNA進(jìn)行同源性分析，旨在揭示其毒力差異的分子基礎(chǔ)。通過提取基因組DNA、標(biāo)記探針、雜交及信號(hào)檢測(cè)等步驟，發(fā)現(xiàn)高毒力株與低毒力株在基因組結(jié)構(gòu)上存在顯著差異。研究結(jié)果為鉤端螺旋體毒力機(jī)制研究提供了重要依據(jù)引言鉤端螺旋體（Leptospira）是一種重要的人獸共患病原體，其毒力差異與基因組結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。分子雜交技術(shù)作為一種經(jīng)典的基因組分析方法，能夠高效檢測(cè)DNA序列的同源性，廣泛應(yīng)用于病原微生物的毒力基因研究。近年來(lái)，隨著鉤端螺...